本发明属于生物指示剂技术领域，具体涉及用于灭菌监测的双荧光体系生物指示剂。所述双荧光体系生物指示剂，由以下成分制成：Tris‑HCl缓冲液、蔗糖、乙酸钠、诱导剂、稳定剂、发光增强剂、胰蛋白胨、酵母粉、L‑丙氨酸、增敏剂、4‑MUG、AMPPD、溴百里酚蓝。本发明添加AMPPD作为碱性磷酸酶的作用底物，碱性磷酸酶可以把其分解为AMP‑D，AMP‑D可产生470mm的可见光；4‑MUG分解后产生4‑MU。双荧光底物可以快速调动微生物体内的β‑葡萄糖苷酶和碱性磷酸酶，两种酶同时作用荧光底物在短时间内积累大量荧光，加快环氧化乙烷灭菌后的生物监测速度，并在避免了假阴性现象的发生。